因業(yè)務(wù)調(diào)整，部分個(gè)人測試暫不接受委托，望見諒。

小鼠銀屑病模型測定方法與應(yīng)用

簡介

銀屑?。≒soriasis）是一種慢性炎癥性皮膚病，以表皮過度增生、免疫細(xì)胞異常浸潤及炎癥因子釋放為特征。其發(fā)病機(jī)制涉及遺傳、免疫和環(huán)境因素的復(fù)雜相互作用。由于人體研究的倫理限制和病理樣本獲取難度，建立可靠的小鼠銀屑病模型成為研究疾病機(jī)制和藥物開發(fā)的關(guān)鍵手段。

小鼠銀屑病模型通過化學(xué)誘導(dǎo)（如咪喹莫特）、基因編輯（如STAT3過表達(dá)）或免疫調(diào)節(jié)（如IL-23注射）等方式模擬人類銀屑病的病理特征，包括紅斑、鱗屑、表皮增厚及Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。這些模型為靶向藥物篩選、免疫調(diào)控通路研究及新型療法評估提供了重要平臺。

檢測項(xiàng)目及簡介

1. 皮膚組織病理學(xué)評估（H&E染色）

   • 目的：觀察表皮增生、角化不全及真皮炎癥細(xì)胞浸潤程度。
   • 方法：取小鼠背部或耳部皮膚組織，經(jīng)固定、包埋、切片后，進(jìn)行蘇木精-伊紅（H&E）染色，顯微鏡下分析角質(zhì)層厚度、顆粒層缺失及微膿腫形成。

2. 免疫組織化學(xué)（IHC）檢測炎癥標(biāo)志物

   • 目的：定位并定量分析炎癥相關(guān)蛋白（如IL-17、TNF-α、Ki-67）。
   • 方法：組織切片經(jīng)抗原修復(fù)后，與一抗孵育，通過辣根過氧化物酶（HRP）或熒光二抗顯色，評估目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。

3. 血清或組織勻漿中細(xì)胞因子檢測

   • 目的：量化促炎因子（IL-17A、IL-23、IFN-γ）水平。
   • 方法：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）或流式細(xì)胞術(shù)（CBA技術(shù)）檢測樣本中細(xì)胞因子濃度。

4. 表皮厚度與表皮細(xì)胞增殖率測定

   • 目的：評估表皮過度增生程度。
   • 方法：使用數(shù)字圖像分析軟件（如ImageJ）測量H&E切片中表皮厚度；通過BrdU或EdU標(biāo)記法檢測角質(zhì)形成細(xì)胞增殖活性。

5. 銀屑病面積與嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評分

   • 目的：臨床表型量化分析。
   • 方法：根據(jù)紅斑、鱗屑和浸潤厚度進(jìn)行0-4分評分，綜合計(jì)算模型組與對照組的疾病活動度差異。

檢測的適用范圍

1. 疾病機(jī)制研究：解析銀屑病中IL-23/Th17軸、表皮屏障功能障礙等通路的作用。
2. 藥物療效評價(jià)：用于局部或系統(tǒng)性藥物（如JAK抑制劑、生物制劑）的篩選及劑量優(yōu)化。
3. 免疫調(diào)節(jié)研究：評估特定免疫細(xì)胞（如Treg、γδ T細(xì)胞）對疾病進(jìn)展的影響。
4. 基因治療與生物標(biāo)志物開發(fā)：驗(yàn)證CRISPR/Cas9基因編輯或RNA干擾療法的效果，并探索潛在診斷標(biāo)志物。

檢測參考標(biāo)準(zhǔn)

1. GB/T 35823-2018《實(shí)驗(yàn)動物 動物實(shí)驗(yàn)通用要求》
   • 規(guī)范動物倫理審查、實(shí)驗(yàn)操作及福利保障。
2. GB/T 39649-2020《實(shí)驗(yàn)動物 皮膚刺激性試驗(yàn)》
   • 指導(dǎo)皮膚病理樣本采集與刺激性評估方法。
3. YY/T 1217-2013《醫(yī)用免疫分析儀》
   • 規(guī)定ELISA、流式細(xì)胞儀等設(shè)備的性能要求與校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)。

檢測方法及相關(guān)儀器

1. 皮膚組織病理學(xué)分析

   • 步驟：
     1. 取模型小鼠皮損組織，4%多聚甲醛固定24小時(shí)；
     2. 梯度乙醇脫水，石蠟包埋后切片（厚度4-5 μm）；
     3. H&E染色，中性樹膠封片；
     4. 光學(xué)顯微鏡（如Olympus BX53）觀察并拍照。
   • 關(guān)鍵儀器：石蠟切片機(jī)（Leica RM2235）、顯微鏡成像系統(tǒng)（Nikon DS-Ri2）。

2. 免疫組織化學(xué)檢測

   • 步驟：
     1. 切片脫蠟至水，3% H?O?阻斷內(nèi)源性過氧化物酶；
     2. 抗原修復(fù)（pH6.0檸檬酸鈉緩沖液，微波加熱）；
     3. 10%山羊血清封閉，一抗（如抗IL-17A，1:200）4℃孵育過夜；
     4. HRP標(biāo)記二抗孵育，DAB顯色，蘇木素復(fù)染；
     5. 全自動切片掃描儀（如Hamamatsu NanoZoomer）定量分析。

3. ELISA檢測細(xì)胞因子

   • 步驟：
     1. 采集血清或制備組織勻漿，離心取上清；
     2. 按試劑盒（如R&D Systems DuoSet ELISA）說明包被抗體；
     3. 加入樣本和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃孵育2小時(shí)；
     4. TMB顯色，酶標(biāo)儀（BioTek Synergy H1）測定450 nm吸光度。

4. 表皮厚度與增殖率分析

   • 工具：ImageJ軟件劃定表皮區(qū)域，自動計(jì)算平均厚度；
   • BrdU法：腹腔注射BrdU（50 mg/kg），取組織切片后通過抗BrdU抗體染色，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞占比。

5. PASI評分實(shí)施

   • 標(biāo)準(zhǔn)：由兩名研究者盲法評估，紅斑、鱗屑、浸潤各按0（無）至4（重度）分計(jì)，總分0-12分。

結(jié)語

小鼠銀屑病模型結(jié)合病理學(xué)、分子生物學(xué)及免疫學(xué)檢測手段，可系統(tǒng)解析疾病進(jìn)展并加速治療策略開發(fā)。通過標(biāo)準(zhǔn)化操作（如參考GB/T 35823）和精準(zhǔn)檢測（如H&E與ELISA），該模型在基礎(chǔ)研究與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中具有不可替代的價(jià)值。未來，隨著單細(xì)胞測序與空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的整合，模型的應(yīng)用深度將進(jìn)一步拓展。

（字?jǐn)?shù)：約1450字）